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                【锌合金电泳】电泳的应用领域与及影响因素

                文章出处:人气: 发表时间:2020-04-27 11:53:49

                    【锌合金电泳】电泳的应用领域与及影响因素


                    电泳已日益广泛地应用于分析化学、生物化学、临床化学、毒剂学、药理学、免疫学、微生物学、食品化学等各个领域。在直流电】场中,带电粒子向带符号相反的电极移动的现象称为电泳(electropho-resis)。1807年,由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷︾德里克·罗伊斯(FerdinandFredericReuss)首先发现了电泳现象,但直到1937年瑞典的Tiselius建立了分离蛋白质的界面电泳(boundaryelectrophoresis)之后,电泳技术才开始应用。上世纪60-70年代,当滤纸、聚丙烯◤酰胺凝胶等介质相继引入电泳以来,电泳技术得以迅速发展。丰富多彩的电泳形式使其应▆用十分广泛。电泳技术除了用于小分子物质的分离分析外,最主要用于蛋白质、核酸、酶,甚至病毒与细胞的研究。由于某些电泳ㄨ法设备简单,操作方便,具有高分辨率及选择性特点,已成为医学检←验中常用的技术。


                    电泳的影〇响因素


                    1.电泳介质的pH值


                    溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决→定物质所带净电荷的多少.对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种◥蛋白质的有效分离.为了保证电泳过程中♀溶液的pH值恒定,必须采用缓冲溶液。


                    缓冲液的离子强度


                    溶液的离子强度(Ionintensity)是指溶液中各离子的摩尔浓度与离子价数平方的积的总和的㊣1/2.带电颗粒的迁移率与离子强度的平方根成反比。低离子强度时,迁移率快,但离子强度过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定.高离子强度时,迁移率慢,但电泳谱带要比低离子强度时细窄。通常溶液的离子强度在0.02~0.2之间。


                    I=1/2∑CiZi2(I:离子强度;Ci:离子的摩尔浓度;Zi:离子价数.)


                    0.154MNaCl溶液的离子强度为:


                    I=1/2(0.154×12+0.154×12)=0.154


                    0.015MNa2SO4溶液的离子强度为:


                    I=1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045


                    3.电场强度


                    电场强度(电势梯度Electricfieldintensity)是指每厘米的电位降(电位差或电位梯度).电场强度对电泳速度起着正比作用,电场〓强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据实验的需要,电泳可分为两〓种:一种是高压电泳,所用电压在500~1000V或更高.由于电压高,电泳时间短(有的样品需数分钟),适用于低分子化合物的分离,如氨基酸,无机离子,包括部分聚焦电泳分离及序列电泳的分离等。因电压高,产热量大,必须装有冷却装置,否则热量可引起蛋白质等物质的变性而不能分离,还因发热引起缓冲液中水分蒸发过多,使支持物(滤纸,薄膜或凝胶等)上离子强度增加,以及引起虹吸现象(电泳槽内液被吸到支持物上)等,都会影响物质的分离.另一种为︼常压电泳,产热量小,室温在10~25℃分离※蛋白质标本是不被破坏的,无需冷却装置,一般分√离时间长。


                    4.电渗现象


                    在电场中液体对于一个固体的固定相相对移动称为电渗.在有载体的电泳中,影响电泳移动★的一个重要因素是电渗。最常遇到的情况是γ-球蛋白,由原点向负极移动,这就是电渗作用所引起的倒移现象.产生电渗现象的原因是载体中常含有可电离的基团,如滤纸中含有羟基而带☉负电荷,与滤纸相接触的水溶液带正电荷,液体便向负极移动。由于电渗现象往往与电泳同时存在,所以带电粒子的移动距离也受电渗影响;如电泳方向与电渗相反,则实际电泳的▓距离等于电泳距离加上电渗的距离.琼脂中∩含有琼脂果胶,,其中含有较多的硫酸根,所以在琼脂电泳时电渗现象很◣明显,许多球蛋白均向负极移☆动。除去了琼脂果胶后的琼脂糖用作凝胶电泳时,电渗大为减弱.电渗所造成的移动距ζ离可用不带电的有色染料或有色葡聚糖点在支持物的中心,以观察电渗的∞方向和距离。